立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,其培养条件较为特殊且具备必须要求。
第一,从营养需要来看,立克次体不可以在人工培养基上成长,需要在活细胞内才能增殖。这是由于立克次体缺少完整的酶系统,不可以独立借助周围环境中的营养物质来合成自己所需的成分,需要从宿主细胞中获得能量、辅酶、氨基酸等营养物质。
在培养办法上,常见的有动物接种、鸡胚接种和细胞培养。动物接种是最早使用的办法,常见的实验动物有豚鼠、小鼠等。将立克次体接种到动物体内,如腹腔接种豚鼠,立克次体可以在动物的组织细胞内成长繁殖,通过察看动物的发病状况与测试组织中的立克次体来进行研究。鸡胚接种一般使用孵化 6 | 7 天的鸡胚,将立克次体接种到鸡胚的卵黄囊中,立克次体可在卵黄囊膜的细胞内成长。这种办法培养立克次体产量较高,且操作相对方便。细胞培养则是现在常见的办法,可使用多种传代细胞系,如 Vero 细胞、L929 细胞等。将立克次体接种到培养的细胞中,在适合的条件下,立克次体可以在细胞内成长繁殖。
培养环境方面,立克次体成长需要适合的温度、pH 值等条件。一般培养温度为 32 | 35℃,pH 值在 7.2 | 7.4 之间。同时,培养过程中要保证无菌操作,预防其他微生物的污染,由于污染会干扰立克次体的成长和研究结果的准确性。除此之外,还需要提供肯定的气体环境,一般需要 5% | 10%的二氧化碳,以保持细胞的正常代谢和成长,为立克次体的成长提供好的环境。
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